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Registro Completo |
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Biblioteca(s): |
Embrapa Gado de Leite. |
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Data corrente: |
25/03/2008 |
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Data da última atualização: |
21/09/2023 |
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Tipo da produção científica: |
Comunicado Técnico/Recomendações Técnicas |
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Autoria: |
BRESOLIN-SOARES, A. P.; CASTRO, C. M.; OLIVEIRA, A. C. de; MITTELMANN, A.; ANTHONISEN, D.; NOLASCO, G. da S.; SILVA, V. N. |
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Afiliação: |
Adriana Pires Bresolin Soares, UFPEL; Caroline Marques Castro, Embrapa Clima Temperado; Antonio Costa de Oliveira, UFPEL; Andréa Mittelmann, Embrapa Gado de Leite; Denilson Anthonisen, Embrapa Clima Temperado; Vanessa Neumann Silva, UFPEL. |
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Título: |
Otimização de protocolo para análise de AFLP em Lolium multiflorum Lam. |
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Ano de publicação: |
2007 |
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Fonte/Imprenta: |
Pelotas: Embrapa Clima Temperado, 2007. |
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Páginas: |
8 p. |
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Série: |
(Embrapa Clima Temperado. Comunicado Técnico, 179). |
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Idioma: |
Português |
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Conteúdo: |
ESTABELECIMENTO DE METODOLOGIA PARA ANÁLISE MOLECULAR DE AZEVÉM ANUAL COM MARCADORES AFLP. O uso de marcadores moleculares no manejo de bancos de germoplasma tem sido cada vez mais expressivo. Entre os diferentes tipos de marcadores moleculares, o AFLP, Amplified Fragment Length Polymorphism, apresenta algumas vantagens para uso na caracterização de recursos genéticos, como a detecção de grande número de bandas informativas por reação, com ampla cobertura do genoma e considerável reprodutibilidade, além de não necessitar de dados de seqüenciamento prévio da espécie para a construção de primers. Embora a análise de AFLP seja freqüentemente utilizada em estudos de variabilidade genética em diferentes espécies, o uso da técnica em Lolium multiflorum ainda é incipiente. Com a finalidade de estabelecer um protocolo para o emprego da técnica de AFLP em azevém anual foi conduzido este trabalho. Foram avaliadas as concentrações iniciais de DNA genômico de 100 e 250 ng, a digestão do DNA com 1,25 e 1U das enzimas EcoRI e MSe, e os respectivos tempos de reação de digestão: 3, 6 e 12 horas. Também foram avaliadas quatro concentrações da solução resultante da ligação dos adaptadores: solução sem diluição; diluída 1:5; 1:10 e 1:20 e duas diluições após a reação de pré-amplificação, de 1:25 e 1:50. Como resultado, foi estabelecido como melhor protocolo, no qual foi obtido um maior número e qualidade de fragmentos, o que utiliza a concentração inicial de DNA genômico de 100 ng, num volume final de reação de digestão 10 ?l, com 1U de cada enzima EcoRI e MseI e tempo de reação de 12h a 37°C, com reação de ligação de adaptadores realizada com a adição da solução de ligação de adaptadores, do Kit AFLP? Analysis System I (InvitroGen Life Technologies, Carlsbad, Calif., USA), e 0,4 U de T4 DNA ligase em um volume final de 10?l, por 2h a 20°C. Após a ligação de adaptadores a diluição deverá ser de 1:5. A reação de pré-amplificação deverá ocorrer a partir de 1?l desta última solução (diluída 1:5), 1,0 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 7.6) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA 0,003% e 1 U de Taq DNA polimerase, completando com mix de pré-amplificação do Kit AFLP? Analysis System I até alcançar o volume final de 11?l. O produto da pré-amplificação deverá ser diluído 1:25 antes de ser procedida à amplificação seletiva, a qual deve ser realizada utilizando 2,5 ?l da solução de DNA pré-amplificado (diluído 1:25), 1 X PCR buffer com Mg Plus [Tris-HCl (pH 8,4) 20 mM, MgCl2 1,5 mM, KCl 50 mM], BSA (0,003%), 1 U de Taq DNA polimerase, 10 ng de primer EcoRI, 1,5 ng de primer MseI, 0,4mM de DNTps e H2O MilliQ? até completar o volume final de 10?l. Com este protocolo uma única combinação de primers permitiu identificar 58 bandas polimórficas na análise de duas populações de azevém anual. MenosESTABELECIMENTO DE METODOLOGIA PARA ANÁLISE MOLECULAR DE AZEVÉM ANUAL COM MARCADORES AFLP. O uso de marcadores moleculares no manejo de bancos de germoplasma tem sido cada vez mais expressivo. Entre os diferentes tipos de marcadores moleculares, o AFLP, Amplified Fragment Length Polymorphism, apresenta algumas vantagens para uso na caracterização de recursos genéticos, como a detecção de grande número de bandas informativas por reação, com ampla cobertura do genoma e considerável reprodutibilidade, além de não necessitar de dados de seqüenciamento prévio da espécie para a construção de primers. Embora a análise de AFLP seja freqüentemente utilizada em estudos de variabilidade genética em diferentes espécies, o uso da técnica em Lolium multiflorum ainda é incipiente. Com a finalidade de estabelecer um protocolo para o emprego da técnica de AFLP em azevém anual foi conduzido este trabalho. Foram avaliadas as concentrações iniciais de DNA genômico de 100 e 250 ng, a digestão do DNA com 1,25 e 1U das enzimas EcoRI e MSe, e os respectivos tempos de reação de digestão: 3, 6 e 12 horas. Também foram avaliadas quatro concentrações da solução resultante da ligação dos adaptadores: solução sem diluição; diluída 1:5; 1:10 e 1:20 e duas diluições após a reação de pré-amplificação, de 1:25 e 1:50. Como resultado, foi estabelecido como melhor protocolo, no qual foi obtido um maior número e qualidade de fragmentos, o que utiliza a concentração inicial de DNA genômico de 100 ng, num volume ... Mostrar Tudo |
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Palavras-Chave: |
Protocolo. |
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Thesagro: |
Análise; Azevém. |
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Categoria do assunto: |
F Plantas e Produtos de Origem Vegetal |
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URL: |
https://ainfo.cnptia.embrapa.br/digital/bitstream/CNPGL/15618/1/comunicado_179.pdf
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Marc: |
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Registro original: |
Embrapa Gado de Leite (CNPGL) |
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| 1. |  | BRUNETTO, G.; CERETTA, C. A.; MELO, G. W. B. de; FELIPE, L.; PAULO, A. A. F.; COUTO, R. da R.; SILVA, L. O. S.; SOMAVILLA, L. M.; ADRIELE, T.; GARLET, L. P.; LESSANDRO, D. C.; COMIN, J. J.; LOVATO, P. E. Do cover crops compete with young grapevines for fertilizer nitrogen? In: WORLD CONGRESS OF VINE AND WINE, 39., 2016, Bento Gonçalves, RS. Anais....Bento Gonçalves, RS: International Organisation of Vine and Wine (OIV): Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento, de 19 a 21 outubro, 2016. Poster nº 1007. WORLD CONGRESS OF VINE AND WINE, 39., 2016. Ibravin, Embrapa Uva e vinho, Governo do Estado do Rio Grande do Sul, Prefeitura Municipal de Bento Gonçalves. 2016.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Uva e Vinho. |
|    |
| 2. | | COUTO, R. R.; BRUNETTO, G.; BELLINASO, R. J. S.; KULMANN. M. S. S.; SOMAVILLA, L. M.; DE CONTI, L.; FACCO, D. B.; CERETTA, C. A.; ZALAMENA, J.; GALARZA, B. P.; MELO, G. W. B. de. Fertirrigação e lixiviação de nitrogênio em solo arenoso de vinhedo. In:CONGRESSO LATINO-AMERICANO DE VITICULTURA E ENOLOGIA, 15., 2015, Bento Gonçalves, RS. p. 101. XV Congresso Latino-Americano de Viticultura e Enologia E XIII Congresso Brasileiro de Viticultura e Enologia. Bento Gonçalves-RS, 3 a 7 de Novembro de 2015.| Tipo: Resumo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Uva e Vinho. |
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| 3. | | HAMMERSCHMITT, R. K.; TIECHER, T. L.; FACCO, D. B.; SILVA, L. O. S.; SCHWALBERT, R.; DERESCHER, G. L.; TRENTIN, E.; SOMAVILLA, L. M.; KULMANN, M. S. S.; SILVA, I. C. B.; TAROUCO, C. P.; NICOLOSO, F. T.; TIECHERE, T.; MAYER, N. A.; KRUG, A. V.; BRUNETTO, G. Copper and zinc distribution and toxicity in ´Jade´/ ´Genovesa´ young peach tree. Scientia Horticulturae, v. 259, 108763, Jan. 2020.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
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| 4. | | PICCIN, R.; COUTO, R. da R.; BELLINASO, R. J. S.; GATIBONI, L. C.; De CONTI, L.; RODRIGUES, L. A. T.; SOMAVILLA, L. M.; KULMANN, M. S. de S.; BRUNETTO, G. Phosphorus forms in leaves and their relationships with must composition and yield in grapevines. Pesquisa Agropecuária Brasileira, Brasília, DF, v. 52, n. 5, p. 319-327, maio, 2017. Título em português: Formas de fósforo em folhas e suas relações com a composição do mosto e a produção em videiras.| Biblioteca(s): Embrapa Unidades Centrais. |
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| 5. | | SOMAVILLA, L. M.; BRUNETTO, G.; TASSINARI, A.; PAULA, B. V. de; DE CONTI, L.; COUTO, R. da R.; MELO, G. W. B. de. Decomposição e liberação de nutrientes de resíduos de plantas de cobertura em vinhedo. In: REUNIÃO SUL-BRASILEIRA DE CIÊNCIA DO SOLO, 11., 2016, Frederico Westphalen, RS.| Tipo: Artigo em Anais de Congresso |
| Biblioteca(s): Embrapa Uva e Vinho. |
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| 6. | | SOMAVILLA, L. M.; SIMEÃO, D. G.; TIECHER, T. L.; HAMMERSCHIMITT, R. K.; OLIVEIRA, J. M. S. de; MAYER, N. A.; PAVANELLO, E. P.; TRENTIN, E.; BELLES, S. W.; BRUNETTO, G. Structural changes in roots of peach rootstock cultivars grown in soil with high zinc content. Scientia Horticulturae, v. 237, p. 1-10, 2018.| Tipo: Artigo em Periódico Indexado | Circulação/Nível: A - 1 |
| Biblioteca(s): Embrapa Clima Temperado. |
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